Каждый выпуск мультсериала Барбоскины имеет независимый от остальных выпусков сюжет, связанный с другими сюжетами единством персонажей и местом действия: город Пёсбург, где есть квартира Барбоскиных в многоквартирном доме, другие помещения этого дома и придомовая территория с детской площадкой. В новых сериях главным местом действия является дача семьи Барбоскиных.

Сюжет мультсериала строится вокруг приключений Розы, Дружка, Гены, Лизы и Малыша Барбоскиных; затрагиваются темы взросления, взаимоотношений между родителями и детьми, нравственных и семейных ценностей, также осмысляются трудности в общении с ровесниками и взрослыми.

Роза- Самая старшая из всех детей, представлена в мультфильме как классическая красотка — блондинка с голубыми глазами. Она любит красивые наряды, украшения и косметику. Любит сериалы про любовь. Часто читает модные журналы.

Дружок- Любит спорт, видеоигры и розыгрыши. Часто получает двойки. Мечтает стать знаменитым футболистом. Любит кататься на скейтборде вместе с Тимохой. В 141 серии «Пятёрка по физкультуре» признаёт, что знания очень нужны и исправляет все свои плохие оценки.

Гена- Увлекается наукой, часто проводит опыты и помогает всем в учёбе. Мечтает о нобелевской премии. Отличник, по всем предметам пятёрки, но бывают затруднения с физической культурой.

Лиза- Любит порядок и обожает сладости. Она часто ябедничает и проявляет вредный характер. Поклонница Жанны Киски и мечтает стать певицей. Картавит.

Малыш- Самый младший из детей. Интересуется занятиями братьев и сестёр. Вся семья относится к нему с добротой и заботой, поскольку он самый маленький. Любит рисовать. Любимая игрушка — плюшевый Зайка, который раньше принадлежал Лизе.

Папа- Отец семейства. Постоянно работает на компьютере. У него есть свой кабинет.

Мама- Мать семейства. Умеет играть на скрипке.

Дедушка- Папа отца семейства, главный моряк и воздухоплаватель.

Тимоха- Друг Малыша, Дружка, Лизы и Гены а также Бойфренд Розы. Также он является соседом Барбоскиных. Увлекается спортом и компьютерными играми. Любит кататься на скейтборде вместе с Дружком. Проявляет симпатию к Розе.