Смешарики — разумные говорящие существа шарообразной формы, имеющие сходство с различными животными. Среди них нет отрицательных персонажей, если не считать нескольких проходных, появлявшихся в одной-двух сериях. Смешарики населяют Страну Смешариков и живут в Ромашковой долине, отделённой от Большого Мира морем, пустыней, лесом и горами. Смешарики живут дружным коллективом, занимаются различными повседневными делами, попадают в необычные, а иногда и опасные ситуации.

Постоянных героев можно условно разделить на четыре группы:

дети: Крош, Ёжик, Нюша, Бараш, позднее Биби (в некоторых сериях, начиная с «Биби и его папа») и Панди (в «Новых приключениях»);
взрослые: Пин, Лосяш, Копатыч, Кар-Карыч, Совунья.
Дети заняты в основном играми и развлечениями, а взрослые — работой, а также заботятся о детях, просвещают их и пытаются воспитывать, а дети признают авторитет старших, но при этом ведут себя независимо.

У каждого из постоянных персонажей есть история жизни и свой характер:

Крош — голубой кролик. Жизнерадостный, общительный и озорной непоседа. Вечно придумывает шалости, за которые отвечают другие.
Ёжик — малиновый ёж с фиолетовыми колючками. Скромный, серьёзный. Собирает коллекции фантиков и кактусов. Лучший друг Кроша.
Нюша — розовая свинка. Романтична, капризна. Мечтает стать принцессой. Обожает моду. Дружит с Барашем, взаимна на его внимание.
Бараш — сиреневый барашек. Добрый, задумчивый и меланхоличный, но иногда бывает раздражённым. Поэт и романтик. Сочиняет стихи для Нюши, поскольку влюблён в неё. Частенько приглашает её на свидания.
Совунья — фиолетовая сова-домохозяйка. Спортивная, заботливая и строгая. Часто лечит других Смешариков.
Кар-Карыч — синий ворон. Бывший путешественник. Любит загадки и тайны, склонен к артистизму: музыкант, актёр, фокусник. Близкий друг Совуньи.
Пин — чёрный пингвин. Изобретатель, родом из Фатерлянда, а потому говорит с немецким акцентом. Добр и умён. Живёт у моря.
Копатыч — оранжевый медведь. Бывший танцор диско и актёр, игравший супергероя Люсьена в сериале «Шоу Люсьена», а ныне простой огородник.
Лосяш — интеллигентный жёлтый лось. Добрый, умный. Имеет компьютер. Ученый-теоретик. Говорит научно и ко всем обращается на «Вы». Знает множество наук. Лучший друг Копатыча.
Биби — маленький робот, созданный Пином. Почти все время находится по делам в космосе и редко приезжает к отцу, однако очень любит его.